1. 칼럼온도의 설정 (CHIRALPAK AD-RH의 경우를 예로)
보호유지나 분리는 칼럼의 온도에 많은 여향을 받습니다.
그림 6-1에 칼럼의 온도를 5,25, 40도로 설정했을때 미치는 영향을 비교했습니다.
이동상:물/acetonitrile=60/40, 유속:0.5ml/min.,
검출:UV(254nm(2-Methyl-1-tetoralone), 220nm(2-Phenyl-2-butanol)
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그림 6-1 분리에 대한 칼럼온도의 영향
→ 저온일 수록 보호유지가 강하고 분리도 잘 되지만 피크가 넓어집니다.
→ 고온에서는 보호유지가 약하고 분리도 나쁘지만 짧은 시간에 분석이 가능합니다.
그러므로 5~40도의 범위에서 칼럼의 온도를 설정하는것이 중요합니다.
2. 유기용매비율의 영향(CHIRALPAK AD-RH의 경우를 예로)
보호유지나 분리에는 유기용매의 혼합비율이 많은 영향을 줍니다.
그림 6-2에 물과 아세토니트릴의 혼합비율을 50/50, 60/40, 70/30으로 설정해서 미치는 영향을 비교했습니다.
이동상:물/아세토니트릴=50/50(상). 60/40(중). 70/30(하). 유속:0.5ml/min, 온도:25도,
검출:UV(254nm)(2Methyl-1-tetoralone), 220nm(2-Phenyl-2-butanol)
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그림 6-2 유기용매 비율의 영향
→ 유기용매의 비율이 높을수록 보호유지가 약하고 분리도 나쁘지만 충분한 분리값이 나온다면 짧은시간내에 분석이 가능합니다.
→ 유기용매비율이 낮을수록 보호유지가 강하고 분리도 잘되지만 피크가 넓어집니다.
그러므로 목적에 맞는 유기용매비율을 설정하는것이 중요합니다.
3. 유기용매의 선택(CHIRALPAK AD-RH의 경우를 예로)
보호유지나 분리는 유기용매의 종류에 따라 많은 영향을 받습니다.
그림 6-3에 아세토니트릴, 에탄올, 메탄올을 사용했을때의 비교를 나타냈습니다.
이동상:물/아세토니틀릴=50/50(상), 물/에탄올=35/65(중), 물/메탄올=25/75(하),
유속:0.5ml/min, 온도:25도, 검출:UV(254nm)(2Methyl-1-tetoralone), 220nm(2-Phenyl-2-butanol)
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그림 6-3 분리에 대한 아세토니트릴, 에탄올, 메탄올의 영향의 비교
각각의 용출력은 비슷하지만, 많은 화합물이 아세토니트릴계 용리액으로 보다 더 샤프한 피크가 나옵니다.
그러나 용매의 종류에 따라 틀리는 화합물도 있습니다.